熟女色国产老熟女乱子人伦视频网|和邻居少妇偷偷好刺激|中文欧美乱码伦视频免费|日本欲求不满的人妻|丰满熟妇久久久久久|丝袜av人妻系列制服丝袜|暴露娇妻让人摸|少妇高潮啪啪|口述那夜呻吟|日本女优在线天堂观看,办公室人妻中出内射,玩弄少妇人妻艳妇乳肉豪妇荡乳av敫@ ,日本丰满熟妇乱又伦

為了生物及醫(yī)藥方面研究的需要,，研究者常需制備脂蛋白純品,，采用的方法有超速離心法,、化學(xué)沉淀法(如硫酸右旋糖苷沉淀法),、凝膠過(guò)濾和高壓液相層析法等,。迄今為止，采用密度梯度超速離心分離純化各種脂蛋白仍是純度較高,、簡(jiǎn)便實(shí)用的好方法,。
超速離心法可分為制備型和分析型兩種，制備型密度梯度離心法可以分為等密度離心法和速率一區(qū)帶密度梯度離心法,，可以選用的轉(zhuǎn)頭有角頭,、甩平頭、垂直頭和區(qū)帶頭,。我們介紹的方法利用不同容量的角式轉(zhuǎn)頭及簡(jiǎn)單配制的梯度液,，在各種型號(hào)的超速離心機(jī)上快速分離血清脂蛋白，可以得到滿意的分離效果,。
一材料和儀器
1梯度液
A液：11．40gNaC1,，0．1gEDTA—Na2，置于1000rnl量筒中,，加入500ml重蒸水及1ml1NNaOH,，混勻至全部溶解。加重蒸水至1000ml最后再加3rI1l重蒸水(NaCI：0．195mo1),。終密度1．O06g／cm~,，pH10．37。
B液：力Ⅱ24．98gNaBr至U100mlA液中(NaC1：0．195mol,，NaBr：2．44mo1),。終密度1．182g／cm3，pH9．72,。
C液：加78．32gNaBr到100mlA液中(NaC1：0．195mol,，NaBr：7．65mo1)。終密度1．478g／cm3,，pH8．86,。
2離心機(jī)、轉(zhuǎn)頭,、離心管
(1)離心機(jī)：HitachiCP—MX系列超速離心機(jī)或其他類似機(jī)組。
HitachiCS一150GXL微量超速離心機(jī)(2)轉(zhuǎn)頭和離心管：S140AT：140,，000rpm,，l，050,，000×g,，10×2ml,，K=5，1PC厚壁管,。S80AT3：80,，000rpm，415,，000×g,，8×8ml，K=23,，6PC厚壁管,。S70AT：70，000rpm,，505,，000×g，8×40ml,，K=44,，40PA管。
二,離心操作
1血漿一血球分離
全血,，角轉(zhuǎn)頭或甩平轉(zhuǎn)頭3000rpm×20min,，沉淀為血細(xì)胞，上清血漿待用,。
2乳糜微粒分離
離心參數(shù)：各種轉(zhuǎn)頭均可用,，4×106(g×min)，10℃,。
梯度液：離心管下部3／4容積為血漿,，上部1／4容積為0．15MNaCl+0．3MEDTA，pH7．4,。離心結(jié)果：乳糜微粒上浮,，離心管傾斜，吸管貼管壁慢吸出(約占血漿容積的2％一6％),。
注意：禁食12h以上供血者血漿中乳糜微粒含量很低,，餐后供血者含量較高。
以往文獻(xiàn)報(bào)道的密度梯度離心法常常指定離心機(jī)和轉(zhuǎn)頭,，提供的方法不能推廣,，且需要進(jìn)行精確到小數(shù)點(diǎn)后4位的密度標(biāo)定，過(guò)程繁瑣,。我們采用等密度梯度分離,，梯度液的配置簡(jiǎn)便可行，不需要做密度測(cè)定或光折射率的換算,。幾乎所有的超速離心機(jī)用戶都有角式轉(zhuǎn)頭,，不論機(jī)型,，均可參照本法用于離心分離脂蛋白，用戶只需根據(jù)所需容量靈活調(diào)整梯度液和樣品的量,，并計(jì)算出離心時(shí)間即可,。對(duì)大量樣品還可用同樣方法、同樣梯度液進(jìn)行區(qū)帶分離,。本法分離出的VLDL,、LDL、HDL還可以進(jìn)一步用長(zhǎng)離心管縮小不連續(xù)梯度密度差,，分離出其亞組分,。需要注意配置梯度液時(shí)室溫應(yīng)接近離心溫度，所用試劑最好達(dá)到分析純級(jí),。